Jaká média se používají pro primární výsev?

V procesu mikrobiologického výzkumu jsou čisté kultury mikroorganismů izolovány, kultivovány a následně studovány na jejich vlastnosti. Kultury sestávající z mikroorganismů stejného druhu se nazývají čisté. Používají se při provádění diagnostických opatření v procesu identifikace infekčních onemocnění, určování druhu a typu.

Kultivace mikroorganismů se provádí pomocí speciálních substrátů – živných médií. Kultivační média pěstovaná v umělých podmínkách umožňují sledovat všechny procesy mikroorganismů – výživu, dýchání a rozmnožování.

Vlastnosti živných médií používaných pro kultivaci

Výsledky studie závisí na kvalitě živného média. Pro vytvoření optimálních podmínek pro život mikrobů musí prostředí splňovat určité parametry:

• Nutriční hodnota. Musí obsahovat všechny potřebné látky, které zajistí snadnou stravitelnost a také uspokojení potravinových a energetických potřeb. V některých případech jsou vitamíny a aminokyseliny speciálně přidávány do živných médií, aby byl zajištěn nezbytný růst buněk.
• Optimální koncentrace vodíkových iontů. Pro zajištění potřebné propustnosti buněčné membrány.
• Izotonicita. Udržet osmotický tlak v prostředí v souladu s tlakem uvnitř buňky.
• Sterilita. Vyloučit cizí mikroby, které mohou narušovat růst.
• Optimální konzistence.
• Redoxní potenciál.
• Jednotnost. Poskytuje konstantní množství přísad.

Pro snadné sledování růstu pěstovaných plodin by médium mělo být průhledné.

Živná média lze klasifikovat podle několika parametrů:

• Složení složky. Podle tohoto kritéria se média dělí na přírodní a syntetická. U přírodních se používají produkty živočišného a rostlinného původu. K přípravě syntetických médií se používají organické a anorganické sloučeniny chemicky čistého typu.
• Úroveň hustoty. Podle konzistence se média dělí na tekutá, hutná a polotekutá. Pro získání požadované hustoty použijte agar-agar nebo želatinu.
• Struktura. Podle tohoto kritéria se prostředí dělí na jednoduchá a složitá.
• Jmenování. Média se dělí na běžná, speciální, elektivní, diferenciálně diagnostická a konzervační.

Vlastnosti složení živných médií pro kultivaci

Hlavními složkami jakéhokoli živného média jsou sloučeniny uhlíku a dusíku. Mnoho mikroorganismů dobře roste a vyvíjí se v přirozených médiích, protože obsahují velké množství potřebných složek. Ale zřídka se používají ke studiu fyziologie metabolismu, protože jejich složení je složité a variabilní. K tomu je pohodlnější a informativnější používat syntetická média.

Příprava kultivačních médií

Při přípravě médií byste měli používat přísně čisté nádoby, které neobsahují cizí látky – alkálie nebo oxidy, stejně jako rez. Optimální je používat smaltované, skleněné nebo hliníkové nádoby. Pokud je potřeba připravit velké objemy médií, používají se speciální vyhnívací nádrže nebo reaktory. Před zahájením vaření nádobí důkladně umyjte, osušte a osušte. Skleněné nádoby je nutné nejprve vyvařit v kyselině chloru a vodíku.

Důležité! Misky na přípravu kultivačních médií se nesmí používat k jiným účelům.

Hlavní složkou většiny kultivačních médií jsou produkty živočišného a rostlinného původu. K přípravě výživných vývarů se používá masová voda nebo digesty z kyselé nebo enzymatické hydrolýzy. Nejčastěji se používá Hottingerův pankreatický digest, kaseinové hydrolyzáty a krmné kvasnice. Na jejich základě se připravují různá média.

Etapy přípravy kultivačních médií

Proces přípravy kultivačního média se skládá z následujících kroků:

1. Vaření. Lze jej provádět na otevřeném ohni, ve vodní lázni, pomocí autoklávu nebo digestoře, které jsou ohřívány párou.
2. Stanovení optimální hodnoty pH. Provádí se pomocí indikátorových papírků. Zařízení používané pro tuto operaci je potenciometr nebo komparátor, což jsou stojany s přihrádkami na zkumavky a sadou pH standardů. V tomto případě se barvy kapalin ve zkumavkách porovnávají s referenční barvou.
3. Osvětlení. Tato operace se provádí, pokud se médium během procesu vaření zakalí nebo ztmavne. Pro vyjasnění lze použít slepičí bílek smíchaný s dvojnásobnou porcí vody, kterou předem důkladně promícháme a provaříme. Někdy se pro tyto účely používá krevní sérum.
4. Rozlít. Provádí se ve speciálních zkumavkách o objemu 3-5 nebo 10 ml. Mohou to být také lahvičky nebo baňky, speciální lahvičky. Pokud se ke sterilizaci médií používají teploty nad 100 °C, nalévají se do suchých čistých nádob. Pokud je pro sterilizaci použita nižší teplota, pak se plnění provádí do sterilních nádob. K nalévání použijte nálevku, na jejímž konci je pryžová hadička s Mora svorkou Filtrace. Provádějte pro tekutá a roztavená želatinová média. K tomu použijte mokré filtry na bázi papíru nebo látky. Agarová média se obtížněji filtrují, protože poměrně rychle tuhnou. Místo toho agarová média nejčastěji používají usazování s tavením v autoklávu.
5. Sterilizace. Režim sterilizace se volí s ohledem na pokyny v receptu a v závislosti na složení složek. Přibližné schéma sterilizace je uvedeno v tabulce.
6. Ovládání. Sterilita je řízena pomocí termostatu. K tomu je médium umístěno v něm na dva dny. Pokud při vyšetření nejsou žádné známky růstu, médium je považováno za sterilní a odesláno k chemické kontrole. Chemická je dalším typem kontroly, díky které se pH konečně nastaví. Provádí se v chemické laboratoři. Dalším typem kontroly je biologická kontrola, pomocí které se zjišťují nutriční vlastnosti média.

1) se sacharidy, mlékem, želatinou

Autokláv s otevřeným víkem nebo Kochův přístroj 100 °C (proudící pára)

30-60 min, 3 dny v řadě (frakční sterilizace)

Skladování médií se provádí při pokojové teplotě, ve skříních speciálně navržených pro tento účel. Kompozice s krví nebo vitamíny se skladují v chladničkách.

Zásady pro přípravu jednoduchých a složitých kultivačních médií

Normální růst mikroorganismů je možný pouze v určitém živném médiu sestávajícím ze specifického souboru složek, navíc tyto složky musí být obsaženy ve zvláštních poměrech.

Jednoduché střední recepty

Izotonický roztok chloridu sodného. Připraveno na základě 1 litru destilované vody smíchané s 9 gramy chloridu sodného. Směs se zfiltruje a upraví se na požadované pH, načež se v případě potřeby sterilizuje při teplotě 120 °C po dobu půl hodiny.

Masový peptonový vývar. Masová voda se smíchá s 1 % peptonu a 0,5 % chemické čistoty. chlorid sodný. Dále vařte na mírném ohni 10-15 minut, dokud se přísady úplně nerozpustí. Dále nastavte požadované pH a poté znovu vařte, dokud se nevytvoří sraženina. Po filtraci se objem přidá k původnímu objemu a sterilizace se provádí při 120 °C po dobu 20 minut.

Hottinterův vývar. K přípravě se používá Hottingerův digest, který se ředí vodou 5-6x s přihlédnutím k obsahu aminového dusíku. Přidejte 0,5% chlorid sodný do zředěné fermentace a poté vařte na mírném ohni, dokud se sůl úplně nerozpustí. Požadované pH se nastaví v již vychlazeném prostředí, poté se po dobu 20 minut provádí filtrace, stáčení a sterilizace.

Masový peptonový agar. Do hotového vývaru (ve fázi před nebo po sterilizaci) se přidá 2-3% agar-agaru a následně se vaří. Směs připravujte na mírném ohni za stálého míchání, dokud se agar zcela nerozpustí. K přípravě můžete použít autokláv nebo Kochův přístroj. V případě potřeby lze připravené médium čiřit, filtrovat nebo sterilizovat.

Polotekutý agar obsahuje 0,4-0,5 % agar-agaru.

Výživná želatina. K přípravě použijte hotový vývar, do kterého se přidá 10-15% želatiny. Směs se zahřívá, ale nevaří, dokud se želatina úplně nerozpustí, načež se kapalina nalije do sterilních nádob a sterilizuje pomocí proudící páry.

Recepty pro složitá prostředí

Média se sacharidy. Hlavní vývar nebo roztavený agar se doplní požadovaným množstvím určitého sacharidu (asi 0,1-2%). Po úplném rozpuštění se kompozice nalije do sterilních nádob a sterilizuje se proudící párou. Po kontrole sterility lze médium použít ke kultivaci.

Média s krví. K jejich přípravě se používají jednoduchá sterilní média, do kterých se za aseptických podmínek přidává defibrinovaná krev (až 30 %). Média na bázi agaru se před přidáním roztaví a ochladí na 45 stupňů Celsia.

Důležité! Je zakázáno rozpouštět média krví, aby nedošlo ke změně vlastností kompozice.

Média s krevním sérem. Připravuje se stejným způsobem jako předchozí formulace. Do základního média se přidává od 10 do 20 % séra bez konzervačních látek, které je předem inaktivováno.

Média se žlučí. Žluč se přidává do jednoduchých médií (10-40 % objemu). Po nastavení požadovaného pH se provádí sterilizace při teplotě 120 stupňů Celsia po dobu 20 minut.

Suché prostředí

Vyrábějí také suchá média, což jsou prášky v lahvích. Jejich štítky uvádějí pravidla pro přípravu kompozic. Mohou to být jak jednoduchá a speciální prostředí, tak elektivní a diferenciální diagnostika. Výhodou suchých přípravků je, že se snadno připravují a lze je použít i v kempingových podmínkách. Mohou být vyrobeny z náhražek masa.

Pozornost! Společnost Medica Group prodává automatické mikrobiologické analyzátory a lahvičky s živnými médii, ale neposkytuje služby pro sběr nebo interpretaci výsledků krevních testů.

Поделиться ссылкой:

8.1. Technika pro výsev a izolaci čistých kultur mikroorganismů

Materiál dodaný do laboratoře je tentýž den podroben bakteriologickému vyšetření. Technika setí závisí na povaze inokulovaného materiálu, konzistenci živného média a účelu studie.

K provedení očkování potřebujete: studovaný materiál, živná média, bakteriologickou smyčku, špachtle (skleněné, kovové), Pasteurovy a odměrné pipety, kovové kyvety nebo tác na přenos naočkovaných kelímků a kovové krabičky na přenos zkumavek, kbelík popř. nádrž s víky pro odhození infikovaného odpadu, lihový nebo plynový hořák.

Tekutý materiál pro očkování se odebírá smyčkou nebo pipetou. Při odběru smyčkou by kapalina měla tvořit tenký průhledný film v prstenci smyčky – „zrcadlo“. Pipety se používají, když je materiál naočkován ve velkém nebo přesně odměřeném objemu.

Způsob odběru hutného materiálu je dán jeho konzistencí. Při výsevu se nejčastěji používá bakteriologická klička.

Veškeré manipulace spojené s výsevem a izolací mikrobiálních kultur se provádějí nad plamenem hořáku. Bakteriální smyčka se před odběrem materiálu kalcinuje v plameni hořáku, poté se ochladí tak, aby při kontaktu s kapalným médiem nezpůsobila var kapaliny a dotyk s agarem nebyl doprovázen jeho roztavením . K ochlazení smyčky je nejlepší ponořit ji do kondenzační kapaliny zkumavky se sterilním živným médiem nebo se sterilním médiem dotknout víčka Petriho misky. Smyčku nemůžete ochladit dotykem povrchu živného média, i když je bez mikrobiálního růstu, protože může obsahovat kolonie, které nejsou viditelné pouhým okem.

Po dokončení výsevu se smyčka znovu spálí, aby se zničila mikrobiální kultura v ní nebo materiál infikovaný mikroorganismy.

Pipety a špachtle používané k očkování se ponoří do dezinfekčního roztoku.

Po naočkování se na spodní stranu Petriho misek napíše název naočkovaného materiálu a do horní třetiny se na zkumavky napíše název naočkovaného materiálu, případně se uvede číslo rozboru a datum naočkování.

8.1.1. Technika setí na pevné a tekuté živné půdy

• Při setí do tekutého živného média se smyčka s materiálem ponoří do média. Pokud je materiál viskózní a nelze jej ze smyčky odstranit, rozetře se o stěnu nádoby a poté se smyje kapalným médiem. Kapalný materiál shromážděný v Pasteurově nebo odměrné pipetě se nalije do živného média.
• Při očkování na šikmý agar s masovým extraktem se zkumavka odebere do levé ruky mezi prsty I a II tak, aby základna zkumavky byla na povrchu ruky a očkování se provádí pod kontrolou očí. Odstraňte zátku ze zkumavky pravou rukou pomocí prstů IV a V, aniž byste se dotkli části, která jde dovnitř zkumavky. Zbývající tři prsty pravé ruky zůstávají volné k nabrání bakteriologické kličky, přes kterou se provádí očkování. Smyčka se drží jako pero. Po odstranění zátky se zkumavka s živnou půdou udržuje v nakloněné poloze, aby se do ní nedostaly cizí mikroorganismy ze vzduchu.

Při inokulaci na šikmý agar se smyčka se subkultivovaným materiálem vloží do zkumavky až ke dnu, spustí se naplocho na povrch živného média a tahy se aplikují klouzavými pohyby zdola nahoru od jedné stěny testu. trubkou do druhé (obr. 8.1).

• • Při výsevu na povrch hustého živného média ze zkumavky do Petriho misky se zkumavka fixuje prsty levé ruky II, III a V a víko Petriho misky se mírně pootevře I a IV prsty levé ruky tak, aby smyčka nebo špachtle mohla volně procházet do vzniklé mezery (obr. 8.2). Malé množství testovaného materiálu odebraného ze zkumavky pomocí bakteriologické kličky se vtírá do povrchu živného média na okraji misky. Smyčka je poté spálena, aby se zničil veškerý přebytečný materiál na ní. Secí linka začíná od místa, kde se nachází materiál. Bakteriologická smyčka je umístěna naplocho na živné médium, aby nedošlo k poškrábání jeho povrchu, a tahy se provádějí přes celé médium nebo v sektorech, přičemž se nejprve natáhne dno kalíšku (za předpokladu, že médium je průhledné) do 4, 8 nebo 16 stejných dílů. Měli byste se snažit zajistit, aby tahy aplikované smyčkou byly umístěny co nejblíže k sobě, protože to prodlužuje celkovou linii setí a umožňuje získat izolované kolonie mikrobů na její koncové části.
• • Pro rovnoměrné rozložení naočkovaného materiálu po povrchu hustého živného média můžete místo smyčky použít tampon nebo špachtli.

Když je v naočkovaném materiálu dostatek mikrobů, rostou ve formě filmu pokrývajícího celý povrch živného média. Tento typ mikrobiálního růstu se nazývá kontinuální nebo trávníkový růst. Výsev trávníku se provádí, když potřebujete získat velké množství mikrobiální kultury jednoho typu.

• Pro naočkování materiálu do tloušťky hustého živného média připravte suspenzi ve sterilní vodě z vodovodu nebo v izotonickém roztoku. Do pipety naberte 0,1–1 ml suspenze (v závislosti na stupni podezření na mikrobiální kontaminaci) a nalijte do prázdné sterilní Petriho misky. Poté se kelímek naplní 15–20 ml maso-peptonového agaru, rozpustí se a ochladí na teplotu 40–45 °C (při této teplotě by zkumavka s médiem naneseným na tvář neměla způsobit pálení senzace). Pro zajištění rovnoměrného rozložení testovaného materiálu v živném médiu se uzavřený kelímek s obsahem mírně pootočí nad povrch stolu.
• Výsev injekcí do sloupce živného média se provádí ve zkumavce s médiem zmrazeným ve formě sloupce. Zkumavka se vezme jako obvykle do levé ruky a smyčka s materiálem se přilepí do středu sloupce na dno zkumavky.
• Pomocí kalibrované bakteriologické kličky (průměr 2 mm, objem 0,005 ml) se moč naočkuje do sektoru A Petriho misky s obyčejným agarem, čímž se vytvoří asi 40 proužků. Poté se smyčka vypálí a provedou se 4 řádkové výsevy ze sektoru A do sektoru I, ze sektoru I do sektoru II a ze sektoru II do sektoru III, vždy po vypálení smyčky (obr. 8.3).

Misky se inkubují při teplotě 37 °C po dobu 18–24 hodin, poté se spočítá počet kolonií vyrostlých v různých sektorech a počet bakterií v 1,0 ml se stanoví podle tabulky níže. 8.1 (tato metoda je akceptována pro stanovení stupně bakteriurie).

Tabulka 8.1. Stanovení počtu bakterií v 1 ml sektorovou inokulační metodou*

Počet kolonií v sektorech

Počet bakterií v 1 ml

*Nařízení č. 535 z 22. dubna 1985 „O sjednocení mikrobiologických (bakteriologických) výzkumných metod používaných v klinických diagnostických laboratořích zdravotnických zařízení“ (Moskva, 1985).

8.1.2. Metody izolace čistých kultur

Čistá kultura se obvykle nazývá soubor homogenních mikroorganismů patřících ke stejnému druhu, získaných z hmoty jedné kolonie, jejíž buňky jsou identické v morfologických, barvicích, kulturních, metabolických a genetických vlastnostech, protože podle existujících koncepcí je mikrobiální kolonie je populace bakteriálních buněk, která vznikla jako výsledek reprodukce jedné mateřské buňky. Mikrobiální kolonie je analogem klonu.

Čisté kultury mikroorganismů stejného druhu, izolované z různých zdrojů, se mohou navzájem lišit mírnými odchylkami v morfologických, kulturních nebo biochemických charakteristikách, aniž by překračovaly hranice svého druhu nebo poddruhu. Takové kultury se nazývají kmeny. Místo dříve pojmenovaných typů se v závislosti na povaze změněné charakteristiky označují tyto morfovary (různé morfologické vlastnosti), sérovary (s antigenními rozdíly), biovary (liší se biologickými vlastnostmi).

Čistá kultura je nezbytná pro studium morfologických, kulturních, biochemických a antigenních vlastností, jejichž souhrn určuje druh zkoumaného mikroorganismu.

Bylo navrženo mnoho různých metod pro izolaci čistých kultur mikrobů z materiálů obsahujících hojnou smíšenou mikroflóru. Nejpoužívanější metodou je mechanická separace mikroorganismů nacházejících se ve zkoumaném materiálu za účelem získání izolovaných kolonií na povrchu nebo v hloubce živného média. Selektivní živná média se široce používají ke stimulaci rozvoje těch mikroorganismů, jejichž čistá kultura má být izolována. Některé typy mikrobů jsou vysoce citlivé na určité faktory prostředí. Individuální rezistence mikrobů vůči jednomu nebo druhému faktoru byla použita k vývoji metod pro izolaci čistých kultur zabíjením doprovodné mikroflóry. Touto metodou dochází k izolaci sporových forem mikrobů, které jsou odolné vůči vysokým teplotám, mykobakterií tuberkulózy, které jsou na rozdíl od jiných mikrobů obsažených ve sputu lhostejné k působení koncentrovaných roztoků minerálních kyselin.

Při izolaci čisté kultury patogenních mikrobů z patologického materiálu kontaminovaného cizí mikroflórou se někdy uchýlí k infekci laboratorních zvířat, která jsou vnímavá k typu mikroba, který má být izolován ze studovaného materiálu. Biologická metoda izolace čisté kultury se používá k vyšetření sputa na obsah pneumokoků a mycobacterium tuberculosis.

Získání čisté kultury proséváním do hloubky média (podle Kocha). Tři zkumavky obsahující 15 ml masového peptonového agaru se umístí do vodní lázně, aby se agar roztavil. Roztavené médium se ochladí na teplotu 43–45 °C. Jedna bakteriologická smyčka testovaného materiálu se umístí do zkumavky. Pro lepší promísení materiálu s médiem několikrát otáčejte naočkovanou zkumavkou a držte ji mezi dlaněmi. Poté se jedna smyčka (kalcinovaná a ochlazená) obsahu 1. zkumavky přenese do 2. a stejným způsobem z 2. do 3. zkumavky. Připravená ředění mikrobů se nalije ze zkumavek do sterilních Petriho misek, označených čísly odpovídajícími číslům zkumavek.

Po zgelovatění média s testovaným materiálem se kalíšky umístí do termostatu. Počet kolonií na plotnách s kultivačním médiem klesá, jak se materiál ředí.

Izolace čisté kultury metodou Drigalski. Roztavené živné médium se nalije do tří Petriho misek. Zmrazené médium musí být vysušeno, protože jeho vlhký povrch podporuje tvorbu souvislého růstu. Jedna kapka testovaného materiálu se přidá do prvního šálku a vetře se sterilní špachtlí do povrchu živného média. Poté, aniž by došlo k propálení špachtle nebo sbírání nového materiálu, se špachtle přemístí do 2. a poté 3. šálku, přičemž se zbývající materiál vtírá do povrchu živného média.

Metoda povrchového prosévání navržená Drigalskym je nejběžněji používanou metodou pro získání čisté kultury mikrobů. Místo špachtle můžete použít smyčku. Materiál na živném médiu je distribuován paralelními tahy po celém pohárku v jednom směru. Potom otočením kalíšku o 90° jsou provedeny tahy ve směru kolmém na první tahy. Při tomto způsobu výsevu se materiál ve smyčce spotřebovává postupně a izolované kolonie mikrobů rostou podél linií tahů aplikovaných na konci výsevu.

Pěstování a izolace čistých kultur anaerobů. Pro pěstování anaerobů je nutné vytvořit určité podmínky, jejichž podstatou je odstranění molekulárního kyslíku ze živného média a prostoru obklopujícího tyto kultury. Další povinnou podmínkou pro zajištění izolace anaerobů z testovaného materiálu je zavedení velkého množství inokula do živného média.

Jediný rozdíl mezi živnými médii používanými pro pěstování anaerobů je jejich nižší obsah volného kyslíku. Nejjednodušší způsob odstranění­Redukce rozpuštěného kyslíku je varem. Bezprostředně před naočkováním materiálu se zkumavky se živnými médii vaří ve vodní lázni po dobu 10–20 minut. Při varu se z média vytěsní vzduch a tím se odstraní kyslík. Čerstvě uvařená živná půda se rychle zchladí ponořením do ledu nebo pod tekoucí studenou vodou, aby nedošlo k jejímu nasycení kyslíkem, a používá se k setí. Aby se snížila difúze kyslíku ze vzduchu, živná média se nalijí na povrch sterilní vazelínou nebo parafínovým olejem (tloušťka vrstvy 1–1,5 cm). Naočkování média se provádí pipetou přes olej v nakloněné poloze zkumavky.

Jako redukční látky se používají glukóza, kyselina askorbová, cystein, glykol a glutathion. Živočišné tkáně parenchymatických orgánů se aktivně vážou na kyslík. Příprava živného média Kitta-Tarozzi (recept 161), široce používaného pro pěstování anaerobů, je založena na této vlastnosti živočišných buněk. Někdy jsou do tekutých živných médií umístěny porézní látky: vata, pemza, které na svém povrchu adsorbují vzduchové bubliny.

K vytvoření bezkyslíkatých podmínek se využívají fyzikální, chemické a biologické faktory.

Fyzikální metody kultivace anaerobů:

• • Vignal-Veyonova metoda. Odebereme 4–5 zkumavek s 0,5% cukerným agarem, rozpustíme a ochladíme na teplotu 40–45 °C. Malé množství testovaného materiálu se napipetuje do obsahu jednoho z nich a důkladně se promíchá. Pro snížení koncentrace materiálu za účelem získání izolovaných kolonií se naočkované médium v ​​množství odpovídajícím objemu zavedeného materiálu přenese z 1. zkumavky do 2., z 2. do 3. zkumavky. Poté se obsah každé zkumavky naplní do kapilár tří Pasteurových pipet.

Aby živné médium při nasávání do pipet neztuhlo, dokud se jejich hrot neodlomí, ponoříme pipety na 3–5 minut do sterilní vody o teplotě 45–50 °C. Po naplnění se prodloužený konec tuby uzavře a umístí do skleněného válce s vatou na dně. Po 2–3 dnech vyrostou v agarovém sloupci jasně viditelné kolonie anaerobních mikrobů. Vyrostlé kolonie se snadno izolují. K tomu se kapilára rozřízne pilníkem nad úrovní zamýšlené kolonie, rozbije se a mikrobiální kolonie umístěná v agaru se odstraní smyčkou a znovu se zasadí do čerstvého živného média;

• • pěstování anaerobů ve vakuu. Vakuové podmínky pro pěstování anaerobů se vytvářejí v anaerostatu nebo exsikátoru. Testovaný materiál nebo mikrobiální kultura se naočkuje do zkumavek s tekutým médiem nebo do Petriho misek s hustým živným médiem. Plodiny se umístí do anaerostatu, poté se připojí k čerpadlu a vzduch se odčerpá. Stupeň zředění vzduchu je určen údaji na vakuometru. Kolonie anaerobů rostou ve vakuu na povrchu hustého živného média.

Chemické metody pěstování anaerobů (Aristovského metoda). Materiál, který má být testován na přítomnost anaerobů, se naočkuje na médium v ​​Petriho miskách a umístí do exsikátoru, na jehož dně je umístěn chemický absorbér kyslíku: hydrogensiřičitan sodný nebo pyrogalol. Poháry s plodinami jsou umístěny na stojanu v rozšířené části nádoby. Zařízení se uzavře víkem a umístí se do termostatu při teplotě 37 * C na 24–48 hodin.

Biologická metoda pěstování anaerobů (podle Fortnera). Do Petriho misky se nalije silná vrstva 5% krevního agaru s 1–2 % glukózy. Uprostřed kalíšku v živné půdě je sterilním skalpelem vyříznuta rýha široká 1–1,5 cm, která rozděluje živnou půdu na dvě poloviny. Jedna z nich je naočkována kulturou anaerobů nebo materiálem testovaným na jejich přítomnost, druhá polovina kulturou aerobů: zázračná tyčinka (Serratia marcescens) nebo E. coli (Escherichia coli). Před výsevem se kelímky suší v termostatu, aby se aeroby spolu s kapkami vlhkosti nemohly dostat na druhou stranu kelímku. Naočkované kelímky se uzavřou a volný prostor mezi dnem a víčkem se utěsní lepicí náplastí, aby se do kelímku nedostal kyslík zvenčí. V termostatu jsou šálky umístěny dnem vzhůru. Rychle rostoucí aeroby, absorbující kyslík v kalíšku, čímž vytvářejí příznivé podmínky pro růst anaerobů.

Anaerostat pro kultivaci anaerobů. Anaerostat – zařízení pro pěstování mikrobů v anaerobních podmínkách – je silnostěnná kovová nebo plastová komora s hermeticky šroubovaným víkem, na které je vakuometr a dva kohouty pro připojení k vývěvě. Místo kyslíku používá směsi plynů.